бесплатно рефераты
 
Главная | Карта сайта
бесплатно рефераты
РАЗДЕЛЫ

бесплатно рефераты
ПАРТНЕРЫ

бесплатно рефераты
АЛФАВИТ
... А Б В Г Д Е Ж З И К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Ч Ш Щ Э Ю Я

бесплатно рефераты
ПОИСК
Введите фамилию автора:


Определение способности почвенных бактерий к разложению синтетических моющих средств

p align="left">Они не только усиливают проникновение АПАВ через кожу, но и увеличивают накопление этих веществ на волокнах тканей, подвергающихся стирке. Они способствуют такому прочному сцеплению АПАВ с тканью, что даже 10-кратное полоскание в горячей воде не приводит к полному освобождению одежды от АПАВ. Причем чем сложнее и разветвленнее структура волокна, тем большее количество молекул АПАВ могут к нему «прилипнуть». Сильнее всего держат ПАВ шерстяные, полушерстяные и хлопчатобумажные ткани. В среднем, потенциально небезопасные концентрации ПАВ сохраняются на тканях до 4 суток. Таким образом, создается очаг постоянной интоксикации внутри самого организма. Прочно закрепившись на одежде, молекулы АПАВ при соприкосновении с кожей относительно легко переносятся на ее поверхность и быстро всасываются внутрь, начиная свой разрушительный маршрут по организму (www.ecocoop.ru).

Говорят, что капля никотина убивает лошадь. Вот научный факт: 100 г. ПАВ убивают лошадь весом в 300 кг в течение 24 часов (Голубева, 2006).

Проанализировав теоретический материал можно сделать вывод, что поверхностно-активные вещества несут серьезную угрозу загрязнения окружающей среды, так как многие из них имеют сложное химическое строение, что затрудняет разрушение их в природе. Накапливаясь в почве, воде такие вещества могут оказывать неблагоприятное воздействие на живые организмы, в том числе и человека. Важную роль в разрушении таких загрязнений играют микроорганизмы. Поэтому, на мой взгляд, поиск и изучение таких микроорганизмов в настоящее время является важной задачей.

2. Объекты и методы исследований

Объектом исследования являются чистые культуры микроорганизмов, выделенные из почв. В работе использовано 13 культур микроорганизмов, большинство из которых является Г+ спорообразующими аэробными палочками. Чистые культуры хранились в холодильнике в пробирках со скошенным питательном агаром. Перед началом исследований было произведено обновление штаммов, путем подращивания их на МПБ с последующим пересевом на ПА.

2.1 Методы исследований

2.1.1 Исследование физиолого-биохимических свойств

Для исследования физиолого-биохимических свойств микроорганизмов использовались дифференцировочные пластины. Пластина представляет собой панель с 20 конусообразными лунками, на дно которых нанесены соответствующие субстраты с индикаторами, стабилизированные поливиниловым спиртом. Панель закрывается крышкой. Панель и крышка изготовлены из полистирола. Субстрат с индикаторами вносят в лунки в жидком виде, затем высушивают и стерилизуют.

Специфическое действие препарата заключается в возможности дифференцировать бактерии на основе определения ферментативных систем по их действию на соответствующие субстраты.

Биохимические дифференцировочные пластины предназначены для определения ферментативной активности бактерий, выделяемых в ходе микробиологических исследований. Это может помочь при дальнейшей идентификации до рода и возможно вида.

Подготовка исследуемых образцов

Перед проведением исследования выделенные культуры подлежат изучению на чистоту.

Идентификацию культур, непосредственно из нативного материала, производят со скошенного мясо-пептонного агара (МПА). Используют культуры выращенных в течение 18-24 часов при температуре при температуре 37 оС, без предварительного подращивания их на МПБ (мясо-пептонном бульоне).

Если выделенная культура микроорганизма находилась какое-либо время на хранении при комнатной температуре или в холодильнике, производят предварительный посев ее на МПБ на 2-4 часа при температуре 37 оС, затеи осуществляют пересев культуры на скошенный МПА. Посевы инкубируют в течение 18-24 часов при температуре 37 оС.

Культуру с МПА используют для приготовления суспензии в стерильной 1% пептонной воде рH 7,2-7,4 и доводят мутность суспензии до 10 единиц по отраслевому стандартному образцу мутности бактериальных взвесей, стеклянному. При отсутствии отраслевого стандартного образца в 4,0 мл стерильной 1% пептонной воды вносят 2-3 петли исследуемой культуры до образования видимой мутности.

Проведение исследования

1. Вскрывают упаковку пластин.

2. Регистрируют на крышке панели номер засеваемого штамма.

3. Открывают крышку и располагают панель на столе.

4. Добавляют пипеткой по 0,15 мл микробной суспензии в стерильной 1% пептонной воде во все лунки панели, кроме 17,18,19 которые оставляют свободными.

5. Для создания анаэробных условий добавляют 1-2 капли стерильного вазелинового масла в лунки для определения аргининдегидрогеназы и уреазы (№№11,20).

6. Закрывают крышку панели.

7. Выдерживают пластины в течение 18-24 часов при температуре 37 оС.

Учет результатов

Учет результатов производят визуально в соответствии с цветовым указателем, приложенным к пластинам, 18-24 часа инкубации при 37 оС.

После окончания инкубации открывают крышку панели и в лунки для выявления ацетилметилкарбинола (№10) добавляют 1 каплю 6%-го раствора альфа нафтола и затем 1 каплю 40% раствора гидроокиси калия; для определения фосфатазы (№8) - 1 каплю 20% раствора гидроокиси натрия; для выявления нитратредуктазы (№9) добавляют 1 каплю реактива Грисса. Реакции учитывают немедленно в лунках №8,9, выявление ацетилметилкарбинола (№10) осуществляют через 15-20 минут после закапывания реактивов.

2.1.2 Определение способности роста на средах с добавлением поверхностно-активных веществ

Для определения способности роста на средах с добавлением различных
ПАВ использовался чашечный метод. Производился глубинный посев по 1 мл бактериальной суспензии. Использовалось 2 среды: питательный агар и среда М9 (рецепты сред см. в приложении). В качестве селективных агентов использовались СМС на основе АПАВ и КПАВ, а также полиакриламид (ПАА) (НПАВ). ПАВ в количестве 1 мл вносились в среды перед стерилизацией (Турковская, 1997).

2.1.3 Определение активности

Определение способности штаммов подвергать деградации
ПАВ определяли с помощью модифицированного нами метода лунок Турковской (Турковская, 1997,): в центре застывшей среды ПА/10 в чашках Петри стерильным пробочным сверлом вырезали лунку. Микроорганизмы высевались штрихом по радиусу от лунки к периферии чашки (посев производится секторами). Затем в лунку стерильно вносили исследуемое ПАВ. Контролем служили чашки с посевами без субстратов. Инкубирование проводили в термостате при 34 оС в течении 3 сут.

Результаты оцениваются через 2-3 суток. Отмечается рост от края чашки к центру, к лунке с ПАВ. Степень активности характеризуется количеством баллов по сравнению с контролем.

2.2 Материалы и оборудование

Культуры микроорганизмов, пробирки, колбы, чашки Петри, шпатели, штативы, предметные и покровные стекла, красители, спиртовка.

При любой микробиологической работе: при посевах, пересевах, выделении, сохранении чистых культур используются стерильные среды, стерильная посуда, стерильные инструменты, чтобы предотвратить возможность попадания посторонней микрофлоры. Посевы производятся в стерильных боксах.

Для обработки посуды применяется стерилизация сухим жаром. Она производится нагреванием в течении 2 часов, при температуре 170 0С в электросушильных шкафах.

Вся посуда перед стерилизацией должна быть вымыта, высушена и завернута в бумагу. Для заворачивания посуды используют газетную бумагу (которая не размокает).

Большинство питательных сред стерилизуют насыщенным паром под давлением в автоклавах. Повышение давления в автоклаве повышает температуру пара, образуемого внутри автоклава и, следовательно, температуру стерилизации (Теппер, 2004).

Среды. В работе использованы полноценные питательные среды: МПА, МПБ. В качестве селективной среды использовалась среда М9 (состав см. в приложении). В качестве селективных агентов использовались СМС на основе АПАВ и КПАВ, а также ПАА (НПАВ).

3. Экспериментальная часть

3.1 Культурально-морфологическая характеристика микроорганизмов

В работе использовалось 13 культур микроорганизмов. Культуральные и морфологические признаки исследуемых микроорганизмов представлены в таблице 1.

Таблица 1. Культурально-морфологичесие признаки микроорганизмов

№ штамма

Признаки

Окраска по Граму

культуральные

морфологические

1

гладкая, светло-фиолетового цвета, полусухая, блеск слабый, полупрозрачная

мелкие, толстые палочки и споры

+

3

полупрозрачная, светло-фиолетового цвета, шершавая, с блеском, слизистая

толстые споровые палочки, прямые и изогнутые, одиночные, по 2, цепочками, с овальными концами

+

4

светло-фиолетового цвета, шершавая, с блеском, слизистая

толстые споровые палочки, одиночные, по 2, цепочками, с овальными концами

+

5

слизистая, гладкая, с блеском, сероватого цвета, выделяет черный пигмент

мелкие, споровые палочки, одиночные и по 2

+

14

молочного цвета, бугорчатая, с блеском, гладкая, слизистая

очень длинные споровые палочки, изогнутые, овальные концы

+

15

полупрозрачная, с блеском, шершавая, светло-фиолетового цвета, слизистая

короткие споровые палочки

+

17

светло-малинового цвета, гладкая, блестящая, полусухая

крупные палочки, неравномерно прокрашенные, фрагментированные палочки, споры

+

19

культура желтоватого цвета, слизистая консистенция, гладкая

мелкие, неспоровые палочки, тонкие, овальные концы

+ (-)

ХХ

серовато-бежевая колония, блестящая, прозрачная, точечный рост, слизистая консистенция, очень слабый

очень длинные палочки, неспоровые, прямые и изогнутые, с чехлами

+

с

кремового цвета, гладкая, слизистая, с блеском

кокки, разные

+

b

кремового цвета, бугорчатая, блестящая, слизистая

мелкие палочки, одиночные, по 2, слабо прокрашенные

+

а1

сероватого цвета, гладкая, слизистая, с блеском

мелкие, короткие палочки

+

а2

полупрозрачная, с блеском, ризоидная поверхность, слизистая

очень мелкие палочки, неярко прокрашенные

+

Из таблицы видно, что большинство из исследуемых микроорганизмов являются Г+ спорообразующими аэробными палочками, за исключением штаммов b, а1, а2 которые являются Г+ неспоровыми аэробными палочками.

Штамм «с» это Г+ кокки. Однако в более молодой культуре он был представлен Г+ палочками. Также можно отметить, что штамм 19 это грамвариабельные неспоровые палочки.

3.2 Физиолого-биохимическая характеристика микроорганизмов

В работе использовано 13 культур микроорганизмов. Были исследованы физиолого-биохимические свойства по 17 тестам. Результаты приведены в таблице 2.

Таблица 2. Физиолого-биохимические свойства микроорганизмов

№ штамма

1

3

хх

5

4

14

15

17

19

а1

а2

b

с

тест

утилизация глюкозы

+

+

+

+

-

+

+

-

+

-

-

+

-

утилизация фруктозы

+

+

+

+

-

+

+

+

-

-

+

+

-

утилизация маннозы

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

-

утилизация мальтозы

+

+

+

+

-

+

+

+

-

-

-

-

-

утилизация лактозы

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

утилизация трегалозы

+

+

+

+

-

+

+

+

-

-

-

-

-

утилизация маннита

+

+

+

+

-

+

+

+

+

-

-

-

-

наличие фосфатазы

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

наличие нитратредуктазы

+

+

+

+

-

+

+

+

+

-

+

-

-

образование ацетилметилкарбинола

+

+

+

+

-

+

+

+

-

-

-

-

-

наличие аргининдегидролазы

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

+

-

-

утилизация ксилозы

+

-

-

-

-

-

-

-

-

-

+

-

-

утилизация сахарозы

+

+

+

+

-

+

+

+

-

-

-

-

-

утилизация арабинозы

+

+

-+

-

-

+

+

+

+

-+

+

+

-

утилизация галактозы

+-

-

-+

-

-

+

-

-

+

-+

+

+

-

утилизация салицина

+

+

+

-

-

+

+

+

-

-

-

+

-

наличие уреазы

-+

-

+

-

-

-

+

+

-

-

+

-

+

Примечания: «+» - реакция положительная, «-» - реакция отрицательная, «-+», «+-» - цвет не полностью соответствует стандарту.

Все исследованные штаммы микроорганизмов обладают фосфатазой, аргининдегидролаза обнаружена только у одного штамма (с), утилизируют маннозу все штаммы за исключением штамма с. Утилизирует ксилозу только штамм с. Утилизация лактоза не обнаружена ни у одного из исследованных штаммов.

По итогам проведения микроскопических исследований можно предположить, что большинство из исследованных культур микроорганизмов относится к р. Bacillus.

3.3 Определение активности микроорганизмов-деструкторов ПАВ

Определение способности штаммов подвергать деградации различные ПАВ осуществляли с помощью метода лунок (Турковская, 1997).

В ходе эксперимента установлено, что выделенные штаммы характеризуются большей активностью по отношению к НПАВ (оценка не менее 4). Менее интенсивный рост отмечался в экспериментах с АПАВ и КПАВ (оценки от 2 до 5). Несмотря на это, отмечаются штаммы, имеющие высокую активность (оценка 4,5) в каждом варианте эксперимента (1,4,15, а2, а1) (см. приложение 2).

Таблица 3. Оценка активности штаммов-деструкторов ПАВ методом лунок

№ штамма

НПАВ

АПАВ

КПАВ

Оценка

1

5

4

5

3

5

4

3

4

5

4

5

5

5

4

3

14

4

5

3

15

5

4

5

17

5

5

3

19

4

-

-

а1

5

4

4

а2

5

4

5

b

5

4

4

с

5

2

3

хх

5

4

3

Примечание: 5 баллов - очень хороший рост; 4 балла - хороший рост; 3 балла - рост средней интенсивности; 2 - слабый рост.

Микроорганизмы, характеризующиеся высокой активностью в присутствии ПАВ всех классов могут иметь большое значение в процессах очистки окружающей среды от загрязнения синтетическими моющими средствами.

3.4 Определение способности роста микроорганизмов на средах с добавлением различных ПАВ

Определение способности роста исследуемых штаммов микроорганизмов на питательном агаре (ПА) с добавлением СМС на основе АПАВ и КПАВ, а также с добавлением ПАА (НПАВ) производилось чашечным методом. Учет результатов производился через 2 суток. Результаты приведены в таблице 4.

Таблица 4. Результаты роста микроорганизмов на среде с различными ПАВ

№ штамма

Наличие роста, КОЕ/мл

КПАВ

АПАВ

НПАВ

1

-

+

+

3

-

+

+

4

-

+

+

5

+

+

+

14

-

+

+

15

-

+

+

17

-

+

+

19

-

+

+

хх

-

+

+

а1

+

+

+

а2

+

+

+

b

+

+

+

с

+

+

+

В ходе эксперимента рост микроорганизмов отмечался на средах с добавлением АПАВ и НПАВ. На среде с добавлением КПАВ только 5 штаммов обнаружили рост.

При микроскопии было установлено, что штаммы микроорганизмов выросшие на среде с добавлением АПАВ не образуют спор. А также не пигментированы. Штаммы, выросшие на среде с добавлением НПАВ ничем не отличались от исходных культур. Штамм №5 на среде с добавлением КПАВ так же не образовывал спор, однако пигментация не изменилась (выделяет черный пигмент).

Выводы

1. В ходе работы исследовано 13 культур микроорганизмов. Все культуры способны расти на средах с добавлением НПАВ и АПАВ. В эксперименте с использованием КПАВ обнаружен рост только 5_ти культур (а1, а2, b, с, 5).

2. Наибольшей активностью исследуемые штаммы обладают по отношению к НПАВ.

3. Все исследуемые штаммы обладают фосфатазой, не утилизируют лактозу. Только штамм а2 обладает аргининдегидролазой. Большинство исследованных штаммов являются аэробными Г+ споровыми палочками. Это позволяет отнести их к роду Bacillus.

Литература

1.
Абрамзон А.А. Поверхностно-активные вещества. Свойства и применение. - 2 изд. - Л., 1981. - 330 с.

2. Алексеева А.В. Коллоидная химия. - СПб: «Наука», 1998 - 290 с.

3. Аналитический обзор Комитета по природопользованию за 2005 год. / под ред. Голубева Д.В. и др. / - М.: «Сезам», 2006 - 25 с.

4. Вербина Н.М. Деградация микроорганизмами неприродных органических соединений в окружающей среде. - М.: Микробиология, 1978. - т. 7.

5. Глазовская М.А. Способность окружающей среды к самоочищению // Природа, 1979. - №3.

6. Градова Н.Б., Бабусенко Е.С. Лабораторный практикум по общей микробиологии. - М.: ДеЛи принт, 2001. - 232 с.

7. Елинов М.Н. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. - М.: Медицина, 1998. - 190 с.

8. Королев В.А. Очистка грунтов от загрязнений. - М.: МАИК Наука // Интерпериодика, 2001. - 365 с.

9. Никитин Д.П., Новиков Ю.В. Окружающая среда и человек: Учеб. пособие для студентов вузов. - М.: Высш. школа, 1980. - 424 с.

10. Новиков Ю.В. Экология, окружающая среда и человек: Учеб. пособие для вузов, средних школ и колледжей. - М.: Фаир-пресс, 2002. - 560 с.

11. Поликарпов Н. Действие ПАГов на микро- и макроорганизмы. Аналитический обзор. 2005 г.

12. Ротмистров М.Н., Ставская С.С. Микробиология очистки воды. - К.: Наук. думка, 1978 г. - 268 с.

13. Рубан Е.Л. Физиология и биохимия представителей р. Pseudomonas. - М.: Наука, 1986 г. - 352 с.

14. Савицкая М.Н., Холодова Ю.Д. Полиакриламид. - Киев: Техника, 1969. -188 с.

15. Ставская С.С. Биологическое разрушение АПАВ. - К.: Наук. думка, 1981 г. - 116 с.

16. Таубман А.Б., Маркина 3. H. Коллоидные поверхностно-активные вещества. / пер. с англ. / - M. - 1966 г. - 199 с.

17. Теппер Е.З. и др. Практикум по микробиологии / Шильникова В.К., Переверзева Г.И. - М.: Агропромиздат, 2004. - 233 с.

18. Турковская О.В. Биологические и технологические аспекты микробной очистки сточных вод и природных объектов от поверхностно-активных веществ и нефтепродуктов: Авт. дис. д.б.н. - Саратов, 2000. - 360 с.

19. Успехи коллоидной химии / под ред. И.В. Петрянова-Соколова, К.С. Ахмедова. - Ташкент, 1987.

20. Хотько Н.И., Дмитриев А.П. Водный фактор в передаче инфекций. / Материалы странички ПАВ. - М. - 2006 г.

21. Яковлев С.В. и др. Охрана окружающей среды: Учебник / С.В. Яковлев и др. - М.: Изд-во АСВ, 1998. - 180 с.

22. ГОСТ 17.4.4.02-84. Охрана природы. Почва. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического и гельминтологического исследования. - М.:Изд-во стандартов, 1981. - 6 с.

23. www.aquaria.com.ua/coretra.html

24. www.ecocoop.ru

Приложение

Среда М9 (г/л):

Na2HPO3 - 6,0

KH2PO4 - 3,0

NaCl - 0,5

NH4Cl - 1,0

НПАВ - 0,2-1,0

рН - 7,0-7,2

Питательный агар (ПА) (г/л):

Панкреатический гидролизат рыбной муки
- 24

Агар-агар - 12-14

NaCl - 4

Дистиллированная вода - 1 л

рН среды 7,3 - 7,5

Способ приготовления

38,0 г порошка размешать в 1 л дистиллированной воды, кипятить 2 мин. До полного расплавления агара, фильтровать через ватно - марлевый фильтр, разлить в стерильные флаконы и стерилизовать при температуре 121 °С в течение 15 мин.

Среду охладить до температуры 45-50 °С, разлить в стерильные чашки Петри слоем 4-6 мм. После застывания среды чашки подсушить при температуре 37-38 °С в течение 40-60 мин (Теппер, 2004).

Страницы: 1, 2, 3


бесплатно рефераты
НОВОСТИ бесплатно рефераты
бесплатно рефераты
ВХОД бесплатно рефераты
Логин:
Пароль:
регистрация
забыли пароль?

бесплатно рефераты    
бесплатно рефераты
ТЕГИ бесплатно рефераты

Рефераты бесплатно, реферат бесплатно, сочинения, курсовые работы, реферат, доклады, рефераты, рефераты скачать, рефераты на тему, курсовые, дипломы, научные работы и многое другое.


Copyright © 2012 г.
При использовании материалов - ссылка на сайт обязательна.